Einzelmolekül Mikroskopie / Spektroskopie

  Bild zeigt Optiktisch Urheberrecht: Fitter Typischer Anblick des optischen Anregungslichtweges in einem Fluoreszenzmikroskop.

In unserem Labor betreiben wir zwei Fluoreszenzmikroskope zur Einzelmoleküldetektion. Zusätzlich zu einem Konfokalmikroskop (MicroTime 200, PicoQuant) mit gepulster Anregung bei 440, 485, 510 oder 638 nm und simultaner zweifarben Detektion, betreiben wir ein Weitfeld (TIRF) Mikroskop, welches ebenfalls eine zweifarben Detektion bei verschiedenen Anregungswellenlängen (488, 532, 640 nm) ermöglicht. Bei der Konfokalmikroskopie liefert die Einzelphotonenzählung (TCSPC) eine Sub-Nanosekundenauflösung. Darüber hinaus machen wir intensiven Gebrauch von der Multi-Parameter Fluoreszenzanalyse. Die Haupttechniken, die bei uns zur Anwendung kommen, sind Einzelmolekül Förster-Resonanzenergietransfer (smFRET), Fluoreszenzkorrelationsspektroskopie (FCS), zeitaufgelöste Fluoreszenzanisotropie (TRA), photo-induzierter Elektrontransfer (PET) und zweifarben Koinzidenz Detektion (TCCD). Ein Schwerpunkt unserer Forschungsaktivitäten liegt auf dem Gebiet der methodischen Entwicklungen. So haben wir eine enge Verknüpfung von zellfreier Proteinbiosynthese und die Anwendung mit Einzelmolekülfluoreszenztechniken etabliert, um einerseits effizient Proben für unsere Fluoreszenzstudien herzustellen, und anderseits Aspekte der Proteinbiosynthese in maßgeschneiderten in vitro Assays zu untersuchen.

 

Publikationen

Katranidis A and Fitter J
Single-Molecule Techniques and Cell-Free Protein Synthesis: A Perfect Marriage
Anal. Chem., 91 (4), 2570–2576 (2019)

D. Kempe, M. Cerminara, S. Poblete, A. Schöne, M. Gabba, and J. Fitter
Single-molecule FRET measurements in additive-enriched aqueous solutions
Anal. Chem., 89, 694-702, (2017)

D. Kempe, A. Schöne, J. Fitter, and M. Gabba
Accurate Fluorescence Quantum Yield Determination by Fluorescence Correlation Spectroscopy
J. Phys. Chem. B, 119, 4668-4672, (2015)

J. Fitter, A. Katranidis, T. Rosenkranz, D. Atta, R. Schlesinger, G. Büldt
Single molecule fluorescence spectroscopy: A tool for protein studies approaching cellular environmental conditions .
Soft Matter, 7, 1254-1259, (2011)